产 品 说 明 书
产品名称：First Strand cDNA Synthesis Kit with DNase（All-in-One)
货号：A1002 产品规格：20T，100T
价格：
A1002-50T First Strand cDNA Synthesis Kit with DNase（All-in-One)20μL×50T ￥780元/包
A1002-100T First Strand cDNA Synthesis Kit with DNase（All-in-One)20μL×100T ￥1280元/包
产品内容：
组分 | 20T | 100T |
5× All-in-One Mix | 80 µL | 2×200 µL |
DNase | 20 µL | 100 µL |
RNase-free water | 400 µL | 2×1 mL |
* 5× All-in-One Mix 包含：逆转录酶，RNA 酶抑制剂，dNTPs, buffer，Oligo(dT)20VN 和随机引物。储存于-20℃
产品介绍
First Strand cDNA Synthesis Kit with DNase（All-in-One)是将 RNA 合成 cDNA 的一个操作更为简便的系统，含有第一链 cDNA 合成所需的全部试剂，仅需加入 RNA 模板和水即可进行逆转录反应， 操作非常方便。使用该逆转录预混液 15 分钟内最长可获得12 kb 大小的 cDNA。合成的 cDNA 推荐用于 qPCR 反应。
该预混液采用特制的高效 DNase，该酶具有热敏感性， 可在高温条件下快速不可逆地失活，因此仅需一次加样，即可同管进行去除基因组 DNA 污染与逆转录反应，与使用DNase I 去除基因组 DNA 污染相比，无需额外加入 EDTA 进行失活，不仅减少了对 RNA 模板的损伤、降低 RNase 污染风险，而且节省实验时间。
使用方法
（1）. 在冰浴的无核酸酶的离心管中配制下列逆转录体系：
组分 | 体积 |
5× RT All-in-One Mix | 4 μL |
DNase | 1 μL |
模板 RNA | 50 ng - 1 μg |
RNase-free water | 加至 20 μL |
注：推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。
2. 轻轻混匀，瞬时离心（使液体沉于底部）；
3. 在PCR 仪上进行下列条件的反应：
37℃，温育 2 min，以去除基因组 DNA 污染；
55℃，温育 15 min；
85℃，孵育 5 min，以终止反应
4. 将获得的产物迅速置于冰上或立即保存于-20℃，用于后续实验。
注意事项
1. RNA 模板的纯度和完整性是影响逆转录效果的重要因素， 如模板中含有蛋白、EDTA、酚等杂质会使 RNA 降解。
2. 若后续实验为 qPCR，逆转录产物的加量应不超过 PCR 体系终体积的 1/10，如 20 μL 的 PCR 反应体系，逆转录产物的加量应不超过 2 μL。
3. 预混液中已经包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物，不仅适用于包含 Poly(A) 结构的真核生物 mRNA，也适用于不含Poly(A)结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不适用于 miRNA 等小 RNA 模板。
产品说明书下载：
A1002First Strand cDNA Synthesis Kit with DNase（All-in-One).pdf
