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First Strand cDNA Synthesis Kit with DNase(All-in-One)

发布时间:2019-01-09 00:50:53人气:118

First Strand cDNA Synthesis Kit with DNase(All-in-One)


产 品 说 明 书

  产品名称:First Strand cDNA Synthesis Kit with DNase(All-in-One)

  货号:A1002  产品规格:20T,100T

  价格:

  A1002-50T      First Strand cDNA Synthesis Kit with DNase(All-in-One)20μL×50T     ¥780元/包

  A1002-100T    First Strand cDNA Synthesis Kit with DNase(All-in-One)20μL×100T ¥1280元/包

  产品内容:

组分

20T

100T

5× All-in-One Mix

80 µL

2×200 µL

DNase

20 µL

100 µL

RNase-free water

400 µL

2×1 mL

  * 5× All-in-One Mix 包含:逆转录酶,RNA 酶抑制剂,dNTPs, buffer,Oligo(dT)20VN 和随机引物。储存于-20℃

  产品介绍

  First Strand cDNA Synthesis Kit with DNase(All-in-One)是将 RNA 合成 cDNA 的一个操作更为简便的系统,含有第一链 cDNA 合成所需的全部试剂,仅需加入 RNA 模板和水即可进行逆转录反应, 操作非常方便。使用该逆转录预混液 15 分钟内最长可获得12 kb 大小的 cDNA。合成的 cDNA 推荐用于 qPCR 反应。

  该预混液采用特制的高效 DNase,该酶具有热敏感性, 可在高温条件下快速不可逆地失活,因此仅需一次加样,即可同管进行去除基因组 DNA 污染与逆转录反应,与使用DNase I 去除基因组 DNA 污染相比,无需额外加入 EDTA 进行失活,不仅减少了对 RNA 模板的损伤、降低 RNase 污染风险,而且节省实验时间。

  使用方法

  (1). 在冰浴的无核酸酶的离心管中配制下列逆转录体系:

组分

体积

5× RT All-in-One Mix

4 μL

DNase

1 μL

模板 RNA

50 ng - 1 μg

 

RNase-free water

加至 20 μL

  注:推荐使用试剂盒提取的高质量 RNA 作为模板。

  2. 轻轻混匀,瞬时离心(使液体沉于底部);

  3. 在PCR 仪上进行下列条件的反应:

       37℃,温育 2 min,以去除基因组 DNA 污染;

       55℃,温育 15 min;

       85℃,孵育 5 min,以终止反应

  4. 将获得的产物迅速置于冰上或立即保存于-20℃,用于后续实验。

       注意事项

  1. RNA 模板的纯度和完整性是影响逆转录效果的重要因素, 如模板中含有蛋白、EDTA、酚等杂质会使 RNA 降解。

  2. 若后续实验为 qPCR,逆转录产物的加量应不超过 PCR 体系终体积的 1/10,如 20 μL 的 PCR 反应体系,逆转录产物的加量应不超过 2 μL。

  3. 预混液中已经包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物,不仅适用于包含 Poly(A) 结构的真核生物 mRNA,也适用于不含Poly(A)结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板,但不适用于 miRNA 等小 RNA 模板。


产品说明书下载:A1002First Strand cDNA Synthesis Kit with DNase(All-in-One).pdf


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