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SYBR Green qPCR Supermix

发布时间:2019-01-09 00:51:08人气:105

SYBR Green qPCR Supermix

  产 品 说 明 书

       产品名称:SYBR Green qPCR Supermix

  CAT:A1001 规格:100T,500T

  价格:

  A1001-100T   SYBR Green qPCR Supermix    1ml¥180元/包

  A1001-500T   SYBR Green qPCR Supermix    5ml¥712元/包

  Supermix 包含 SYBR Green dye, dNTP, PCR buffer,热启动 Taq 聚合酶,参比染料。

  储存条件

  -20℃避光保存,开封后可放置于 4℃,有效期见外包装。

  产品介绍

  SYBR Green I 是一种结合于所有 dsDNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发光的染料。SYBR Green I 与dsDNA 结合后荧光信号会增强 800-1000 倍,是一种常用的 qPCR 荧光染料。具有高灵敏度,信噪比高等优势,可应用于基因表达差异分析,基因芯片等。

  SYBR Green qPCR Supermix 为一款应用于 qPCR 基因表达分析的明星产品,本产品在试剂稳定性、特异性、高 GC 含量序列扩增能力及抗抑制能力等方面都有了很大提升,更关键的是优化了产品的使用步骤。

  该试剂中含有特殊的 ROX 参比染料, 适用于所有qPCR 仪器,无需在不同的仪器上调整 ROX 的浓度,只需在配制反应体系中加入引物和模板即可进行扩增。

  使用方法

  1. 取出 2×  SYBR Green qPCR Supermix,引物,模板,RNase-free 水,恢复至室温,轻轻涡旋,充分混匀。

  2. 按如下体系制备反应混合液:

  注 1. 模板浓度:DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同种类的 DNA 模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯度稀释, 确定合适的 DNA 模板添加量。gDNA 做模板时,通常 1-10 ng 即可。cDNA 作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应体系总体积的 10%。注 2. PCR 引物的终浓度通常为 0.4 μM,可以得到较好的结果,反应性能较差时,可以在 0.2-1 μM 范围内调整引物浓度。

  3. 轻轻涡旋混匀反应混合液,转移固定体积至 PCR 管。

  4. 您可以根据扩增模板的性质和仪器的功能,选择以下两个程序之一进行实验。

  A. 两步快速扩增法

  这个程序适用于大多数引物 Tm 为 60℃的扩增,熔解曲线遵循您所用仪器提供的标准流程执行。

  B. 三步扩增法

  这个程序适用于扩增温度比退火温度高的实验。例如,如果扩增片段有相对较长的引物,容易产生非特异性的扩增,在

  更高的温度下进行延伸可以降低非特异性扩增。熔解曲线遵循您所用仪器提供的标准流程执行。

  注:延伸时间请根据使用的实时定量 PCR 仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整。

  5. 将待检样品,放入 PCR 仪,运行 PCR 程序。

  6. 分析实验数据。

       注意事项

  1. 退火温度:退火温度应根据引物 Tm 值设定,通常是 50-65℃为佳。不过,引物 Tm 值(和扩增温度)应尽可能接近 60℃(但仍在 50 - 60℃范围内),减少退火和变性温度之间的差距,加快 PCR 扩增速度。

  2. 退火时间:退火时间应控制在 5-20s 范围内,退火时间延长可增强扩增效率,退火时间缩短可降低非特异性扩增, 可根据实验情况进行适当调整。

  3. 为保证产品效果,应尽量避免反复冻融。



      产品说明书下载 :A1001SYBR Green qPCR Supermix.pdf


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